1.脫毒原理
病毒在寄主植物體內是隨著植物維管系統轉移,然而在根尖與莖尖分生組織中沒有維管束系統,病毒很難運動,病毒在寄主分生組織的轉移速度落后于莖尖生長速度,因此,在植物根尖和莖尖分生組織中不含病毒粒子或者病毒粒子濃度很低。
2.莖尖脫毒方法
2.1取樣與消毒
從選定的植株上取頂芽梢段進行消毒接種。取頂芽梢段3-5cm,剝去大葉片,用自來水沖洗,然后用75%的酒精消毒30s左右,用0.1%的升汞消毒10min,最后用無菌水沖洗4-5次。
2.2剝離莖尖與接種
在超凈工作臺上,用解剖刀(針)仔細剝離幼葉,直至露出生長點,用刀尖切下帶1-2個葉原基的生長點,將切下的莖尖轉移至培養基上。
2.3培養
接種后的材料在(25±2)℃,每天光照10-16h的條件下培養。2個月左右,莖尖可再生出綠芽,期間應更換新鮮培養基。
2.4生根誘導
一些植物莖尖培養形成綠芽后,基部很快生出不定根,而另一些植物則不產生不定根,必須將無根苗轉入生根培養基,才能生成不定根成為完整植株。
3. 影響莖尖脫毒培養的因素
(1)莖尖大小:莖尖外植體的大小與脫毒效果成反比,即莖尖越小,脫毒效果越好。但莖尖大小與莖尖的成活率成正相關,即莖尖越小培養難度越大,成活率越低。綜合考慮一般切取0.2-0.5mm帶1-2個葉原基的莖尖外植體較合適。
(2)培養條件:在莖尖培養中,光下培養效果通常比暗培養效果好。
(3)外植體的生理狀態:莖尖最好從活躍的芽上切取,一般情況下頂芽莖尖比腋芽莖尖效果好。