1.簡介
微生物污染是組織培養中普遍存在的問題。在培養基中添加殺菌劑已成為防治污染的一種重要方法。但目前研究主要集中在防治細菌污染方面，對真菌污染較少顧及。故本實驗對組培過程中易污染的真菌分離與鑒定，并進行一些殺菌劑的抑菌實驗，以期能找到有效降低真菌污染的方法。
2.實驗材料
2.1培養基
MS基礎培養基，馬鈴薯葡萄糖培養基。
2.2組培材料與殺菌劑
組培材料：煙草
殺菌劑：醫用抗生素：制霉菌素、灰黃霉素、酮康唑。實驗室常用殺菌劑：次氯酸鈉。
3.實驗方法
3.1污染真菌的收集與鑒定
收集：將5個MS培養基平板開蓋后放置在超凈工作臺上，靜置20min后,蓋上培養皿，放入培養箱25℃下培養3～5d，形成明顯的菌落以便分離鑒定。
分離與鑒定：使用馬鈴薯葡萄糖培養基對收集到的真菌進行化線分離,純化培養，直至形成單菌落。通過形態學特征鑒定真菌。
3.2抑菌試驗
已從鑒定的真菌中每屬選取1 個代表種為材料，使用濾紙片法測定各種殺菌劑的抑菌效果。從真菌培養物中提取孢子，稀釋至102cfu /ml。將孢子懸浮液以每付平板0.5ml的量加入到50℃左右的MS培養基中，混勻后傾到平板。用無菌鑷子取半徑0.5cm的圓形無菌濾紙片，分別浸泡在經過濾滅菌的不同濃度的制霉菌素、灰黃霉素、酮康唑(均分為200mg/L、50mg/L、10mg/L 3個濃度)及次氯酸鈉溶液(分2%、0.5%、0.1%3個濃度)中1min，等距置于混有真菌孢子的培養基表面。每組設6個重復樣本。于25℃培養5d后觀察結果。如有抑菌作用，則濾紙片周圍無菌生長，形成抑菌環。根據抑菌環大小，判斷抑菌效果。
4.結果分析
4.1真菌的分離與鑒定：通過對空氣中污染真菌的分離純化，共獲得9種真菌，其中曲霉屬(Aspergillus) 2種，毛霉屬(Mucor) 2 種，青霉屬( Penicillum ) 3 種, 木霉屬( Trichoderm a) 1種，根霉屬(Rhizopus) 1種。這些均為常見真菌，它們的孢子在空氣中分布廣，含量大，易造成污染。且其在培養基上生長迅速，繁殖旺盛，較短時間內就會威脅到植物的生存。組培中需對這些真菌重點防治。
4.2不同濃度殺菌劑抑菌效果比較：高濃度次氯酸鈉對這5種真菌均有很強的抑制作用，制霉菌素抑菌效果最明顯，灰黃霉素的抑菌效果不理想。
4.3混合殺菌劑抑菌試驗結果：用50mg/L酮康唑+50mg/L制霉菌素+ 0.1%次氯酸鈉組成的混合殺菌劑，抑菌效果好，對植物傷害小，是良好的防真菌污染添加劑。